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背景介绍:

丝氨酸和苏氨酸翻译后修饰是指蛋白质在合成后经历的化学改性过程,中磷酸化和糖基化是最为常见的修饰形式。丝氨酸和苏氨酸上的翻译后修饰类型主要包括磷酸化、O-糖基化等类型。这两种氨基酸残基经修饰后,能显著改变蛋白质的活性状态、稳定性及相互作用能力,从而对细胞信号转导、代谢调控等多个关键生物过程起到重要作用。深入研究这些修饰有助于揭示生命活动背后的分子机制,并可能为疾病治疗提供新的靶点。因此,丝氨酸和苏氨酸翻译后修饰在基础生物学研究和临床应用中具有不可或缺的重要价值。

bstbet贝斯特官网生物具备先进的质谱技术,能够直接且精确地解析多种类型的蛋白质翻译后修饰及其发生的具体位点。通过巧妙结合分离富集技术和同位素标记等先进手段,可以实现对各类修饰的大规模、高通量定性和定量分析,为深入研究蛋白质翻译后修饰提供了强有力的技术支撑。


技术平台(针对O-糖基化):

O-连接的糖基化是将糖链转移到多肽链的丝氨酸、苏氨酸的氧原子上的生物化学过程。利用UDP-GalNAz、Y289L GalT1试剂,这些试剂能够将糖基化位点上的糖分子标记上-N3基团,后续通过点击化学、酶解、富集等步骤,并借助高分辨质谱技术,能够精确地鉴定出O-糖基化的具体位点,从而揭示该翻译后修饰在生物体内的重要作用。



 

我们的优势:

1.专业技术优势:团队经验丰富,顶级期刊发表,提供业界权威技术服务,个性化方案,保障最佳实验效果。

2.严谨质量管理:成熟质量管理体系,遵循ISO9001标准,确保报告真实可信。

3.一站式服务:覆盖探针设计、合成、靶点发现、生信分析全流程,咨询到交付一站式,及时反馈进度,保证客户满意度。

4.高性能设备:配备Thermo Fisher Orbitrap Exploris 480、Thermo Flsher Q Exactlve HF-X、Bruker timsTOF等先进质谱仪,助力科研突破。


我们的服务:

项目名称

基于高分辨质谱的丝/苏氨酸翻译后修饰

样品形式

裂解液、活细胞、组织样本

硬件平台

VanquishNeo UPLC液相串联Orbitrap Exploris 480 mass spectrometer (Thermo Fisher Scientific);

EASY-nLC1200 UPLC液相串联Q E HF-X mass spectrometer (Thermo Fisher Scientific)

项目周期

4-8周

交付标准

项目报告(包含胶图、位点信息等)

价格

咨询


案例展示:

1.O糖基化

项目目的:本项目旨在通过质谱技术,对O-GlcNAcylation翻译后修饰进行深入的化学蛋白质组学分析。

解决方案:采用代谢标记与质谱相结合的方法,对O-糖基化的位点进行精确且全面的定性分析。在实验过程中,首先利用荧光胶技术确定Y289L GalT1酶的量,随后,按照严格确定的实验条件进行质谱分析。经过两次重复实验,共同鉴定到了36个可信的糖基化位点。示例为其中一个典型的二级谱图。

 



2.N糖基化

     N-糖基化是真核生物中最普遍的糖基化形式,它在蛋白质折叠、定位、运输、稳定性等方面发挥重要作用。将蛋白变性、还原烷基化、酶切处理后,在H218O缓冲液环境中使用去糖基化酶处理,则将含复合型糖链修饰的天冬酰胺转化为带有18O的天冬氨酸,对该特定修饰变化进行鉴定,结合N-X-S/T motf识别,确定蛋白的N-糖基化修饰位点。


N糖基化流程图


N糖基化实验数据图